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一、設(shè)計要求

根據(jù)《病原微生物實驗室生物安全管理條例》、《實驗室生物安全通用要求》、《生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范》等文件，為本方案設(shè)計依據(jù)。

1、概述

臨床基因擴增實驗又稱PCR實驗,是專門用來檢驗艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內(nèi)所含的基因進行擴增的方法,測出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。由于該檢測方法可以測出普通檢驗難以檢測岀的病毒并具有靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低等優(yōu)點,因此被臨床醫(yī)生廣為認可,已廣泛應(yīng)用于醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測部的禽疫病診斷。但是,這種實驗需要有能保證絕對安全、配置合理的實驗室和非常規(guī)范的操作為前提。近年來對臨床基因擴增檢驗實驗室的建設(shè)越來越得到重視,因為它對檢測結(jié)果的可靠性、準確性和安全性起到至關(guān)重要的作用。本設(shè)計方案主要從臨床基因擴增檢驗實驗室的平面布局,空調(diào)通風系統(tǒng)設(shè)計、氣流控制和污染的防制幾個方面對實驗室設(shè)計中的主要特點進行了闡述。臨床基因擴增檢驗實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染。因此,實驗室的平面布局、空調(diào)通風系統(tǒng)設(shè)計、氣流控制等都是圍繞這個核心問題進行的。下面就對這幾個方面分別進說明。

2、PCR實驗室平面布局臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域:試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染,進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行,即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)。各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進行。

PCR實驗室設(shè)計方案

3.1試劑存和準備區(qū)

3、實驗室空調(diào)通風系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。

該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴格的要求。

3.2標本制備區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸DA提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DA時DNA的合成。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。

3.3擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為DA或CDA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的CDA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行在巢式PCR測定中,通常在第一輪擴增后必須打開反應(yīng)管,因此巢式擴増有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。

3.4擴增產(chǎn)物分析區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區(qū)域可不設(shè)。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源,因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。

4、污染的預(yù)防與控制

PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型:擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組DA的污染；試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止，直到找到污染源為止,而且實驗結(jié)果必須作廢,需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應(yīng)是預(yù)防,而不是排除。

4.1工作區(qū)域的嚴格劃分

(1)各個實驗區(qū)域設(shè)置合理

(2)各個實驗區(qū)域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地面鱖色等),以避免各個不同實驗區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。

4.2合理的系統(tǒng)設(shè)置

(1)合理的空調(diào)通風系統(tǒng)設(shè)置,盡量釆用全送全排的空調(diào)系統(tǒng);

2)嚴格的氣流壓力控制,保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。

4.3規(guī)范的操作

(1)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須進行上崗培訓,經(jīng)培訓冾格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作

2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經(jīng)常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施;

(3)清潔工作及時、正確。實驗工作結(jié)朿后,必須立即對本區(qū)進行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進行摽拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設(shè)備還應(yīng)進行高壓消毒處理。

4.4嚴格的管理

(1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關(guān)的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設(shè)置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門

(2)在各個實驗區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域;

(3)盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。

4)擴增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理,如焚燒等

5)擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),應(yīng)特別注意實驗人員的安全防護。

4.5完備的實驗室配套設(shè)施

完備的實驗室配套設(shè)施是保證實驗工作的必要條件,應(yīng)根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,如超凈工作臺、離心機、加樣器等。

表1.PCR實驗室實施設(shè)備

我公司是一家專業(yè)從事于實驗室前期建筑咨詢，系統(tǒng)規(guī)劃設(shè)計、施工、實驗室家具設(shè)計制作的股份制有限公司。作為實驗室建設(shè)行業(yè)的專業(yè)者，我們致力于引進國際上先進的實驗室技術(shù)，并予以吸收國產(chǎn)化，先后推出了歐式，美式實驗臺，VAV變風量控制系統(tǒng)，實驗室智能化系統(tǒng)，由此獲得廣大客戶的認可。

二、設(shè)計方案

1、主體結(jié)構(gòu)

主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。標準的四個區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)將PCR過程分成試劑準備、標本制備、PCR擴增和產(chǎn)物分析四個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū),同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié),使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。可打開緩沖區(qū)I,緩沖區(qū)Ⅱ和PR擴增區(qū)的排風扇往外排氣,在實驗區(qū)的外墻上稻各扇門上都安裝有風量可調(diào)的回風口,空氣通過回風口向室內(nèi)換氣。

表2.PCR實驗室環(huán)境要求與設(shè)施設(shè)備

2、消毒

在四個實驗區(qū)和四個緩沖區(qū)頂部以人及傳送窗內(nèi)音安裝有紫外燈,供消毒用。在試劑準備區(qū)和標本制備區(qū)還設(shè)置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒。

3、機械連鎖不銹鋼傳遞窗

4、試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染(人物分流)。

5、地面地面使用PVC卷材地面,基層地面做自流坪處理，整體性好。便于進行清掃，耐腐蝕。

6、照明

燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。在建設(shè)的過程中應(yīng)注意:

(1)規(guī)范的安裝流程和全面的服務(wù)流程。

（2）嚴格按照規(guī)范科學設(shè)計的安裝流程。

（3）安裝前需要確定以下安裝條件，如：電源電壓，電源進線位置，電話網(wǎng)絡(luò)線進線位置，進水水壓，最小安裝空間，地面平整度，通風孔、進水管和下水管的位置等，理想狀態(tài)的空間尺寸和通風口尺寸。